vguitВестник Воронежского государственного университета инженерных технологийProceedings of the Voronezh State University of Engineering Technologies2226-910X2310-1202VSUET10.20914/2310-1202-2013-3-178-182vguit-704Research ArticleБиотехнология и бионанотехнологияBiotechnology, bionanotechnology and sugary products technologyПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОЙ α-L-ФУКОЗИДАЗЫ (alfB)OBTAINING THE RECOMBINANT α-L-FUCOSIDASE (alfB)КирьяноваС. В.KiryanovaS. V.

Аспирант, кафедра биохимии и биотехнологии

vestnikvgta@mail.ruЧеренковД. А.CherenkovD. A.

Доцент, кафедра биохимии и биотехнологии

vestnikvgta@mail.ruТолкачеваА. А.TolkachevaA. A.

Аспирант, кафедра биохимии и биотехнологии

vestnikvgta@mail.ruКорнееваО. С.KorneevaO. S.

Профессор, кафедра биохимии и биотехнологии

vestnikvgta@mail.ruВоронежский государственный университет инженерных технологийRussian Federation20130812201503178182Copyright © Кирьянова С.В., Черенков Д.А., Толкачева А.А., Корнеева О.С., 20132013Кирьянова С.В., Черенков Д.А., Толкачева А.А., Корнеева О.С.Kiryanova S.V., Cherenkov D.A., Tolkacheva A.A., Korneeva O.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.vestnik-vsuet.ru/vguit/article/view/704

В данной работе ген α-L-фукозидазы (AlfB), амплифицированный с помощью ПЦР, был клонирован в составе векторной плазмиды pet23b+ по сайтам EcoR1 - Xho1. Экспрессия гена происходила в клетках Escherichia coli top 10 под контролем Т7-промотора. Был получен штамм-продуцент рекомбинантного белка α-L-фукозидазы, в результате оптимизации условий действия фермента были определены оптимальные значения рН и температуры.

In this study the gene α-L-fucosidase (AlfB), amplified by PCR was cloned in the vector plasmid pet23b + sites for EcoR1 - Xho1. Gene expression occurred in the cells of Escherichia coli top 10 under the control of the T7 promoter. The strain-producer recombinant protein α-L-fucosidase was obtained, optimum values of pH and temperature was determined by optimizing the conditions of the enzyme action.

α-L-фукозидазаклонированиеэкспрессияEscherichia coliReferencesЧеренков, Д.А. Фукоза: биологическая роль, пути получения и перспективы применения [Текст] / Д.А. Черенков, Ю.А. Рыбаков, Т.В. Санина и др. // Биотехнология. - 2010. №6. - С. 63-71.Cherenkov, D.A. Fucose : biological role, ways of obtaining and application prospects [Text] / D.A. Cherenkov, Y.A. Rybakov, T.V. Sanina, et al // Biotechnology. - 2010. - № 6. - P. 63-71 .Aminoff, D. Purification and general properties of 1,2 -L-ficosidase from Clostridium Perfringens [Text] / D. Aminoff, K. Furukawa // J. Biol. Chem. – 1970. – V. 245. – P. 1659-1669.Aminoff, D. Purification and general properties of 1,2 -L-ficosidase from Clostridium Perfringens [Text] / D. Aminoff, K. Furukawa // J. Biol. Chem. – 1970. – V. 245. – P. 1659-1669.Kurimura, Y. Efficient production and purification of extracellular 1,2-alpha-L-fucosidase of Bacillus sp. K40T [Text] / Y. Kurimura // Biotechnol Biochem. - 1995. – V. 59. - № 4. – P. 589-594.Kurimura, Y. Efficient production and purification of extracellular 1,2-alpha-L-fucosidase of Bacillus sp. K40T [Text] / Y. Kurimura // Biotechnol Biochem. - 1995. – V. 59. - № 4. – P. 589-594.Katayama, T. Molecular cloning and characterization of Bifidobacterium bifidum 1,2-α-l-fucosidase (AfcA), a novel inverting glycosidase (Glycoside Hydrolase Family 95) [Text] / Katayama T. // J Bacteriol. – 2004. – V. 186. № 15. – Р. 4885–4893.Katayama, T. Molecular cloning and characterization of Bifidobacterium bifidum 1,2-α-l-fucosidase (AfcA), a novel inverting glycosidase (Glycoside Hydrolase Family 95) [Text] / Katayama T. // J Bacteriol. – 2004. – V. 186. № 15. – Р. 4885–4893.Sambrook, J. Molecular cloning [Text]: laboratory manual / J. Sambrook, E.F. Fritsch, T. Maniatis. - New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989. – 452 p.Sambrook, J. Molecular cloning [Text]: laboratory manual / J. Sambrook, E.F. Fritsch, T. Maniatis. - New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989. – 452 p.Rodriguez-Diaz, J. Utilization of natural fucosylated oligosaccharides by three novel alphaL-fucosidases from a probiotic Lactobacillus casei strain [Text] / J. Rodriguez-Diaz, V. Monedero, M.J. Yebra // Appl. Environ. Microbiol. – 2011. – V. 77. – P. 703-705.Rodriguez-Diaz, J. Utilization of natural fucosylated oligosaccharides by three novel alphaL-fucosidases from a probiotic Lactobacillus casei strain [Text] / J. Rodriguez-Diaz, V. Monedero, M.J. Yebra // Appl. Environ. Microbiol. – 2011. – V. 77. – P. 703-705.Sano, M. Purification and characterization of alpha-L-fucosidase from Streptomyces species [Text] / M. Sano, K. Hayakawa, I. Kato // J. Biol Chem. – 1992. – V. 267. - № 3. – P. 1522-1527.Sano, M. Purification and characterization of alpha-L-fucosidase from Streptomyces species [Text] / M. Sano, K. Hayakawa, I. Kato // J. Biol Chem. – 1992. – V. 267. - № 3. – P. 1522-1527.Полыгалина, Г.В. Определение активности ферментов [Текст]: справочник / Г.В. Полыгалина, В.С. Чередниченко, Л.В. Римарева. - М.: ДеЛи принт, 2003. - 375 с.Polygalina, G.V. Determination of enzyme activity [Text]: a guide / G.V. Polygalina, V.S. Cherednychenko, L.V. Rimareva. – M.: DeLee print, 2003. - 375 p.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.