Целью исследования явилось изучение особенностей клонального микроразмножения у трех вариаций Ludisia discolor. В качестве эксплантов использовались выводковые почки, апикальные побеговые меристемы, незрелые семена из 15, 20 и 25дневных коробочек и зрелые семена из раскрывшихся коробочек. Они выращивались на модифицированной среде Мурасиге и Скуга. Для стерилизации и посадки микроскопических зрелых семян была разработана специальная методика, которая позволяет одновременно стерилизовать большое количество таких семян и быстро высаживать их на питательную среду в стерильных условиях. Зрелые семена прорастали на 60–70 день. Семена от 25дневных коробочек показали наилучшие результаты среди незрелых семян. Они давали массовые всходы уже на 25–30 день после посадки. Валик будущего первого листа у протокормов в темноте закладывался через 2 месяца после прорастания. Перевод в световой режим индуцировал быстрый гемморизогенез – образование первых зеленых листьев, стебля и придаточных корней. Около 20% из высеянных семян от 20ти дневных коробочек набухли или образовали протокормы. Семена от 15дневных коробочек не прорастали вообще. Посадка незрелыми семенами является наиболее эффективным методом клонального размножения L. discolor в условиях in vitro. Однако ее успех зависит от точности выбора стадии в развитии семян, что возможно осуществить только в оранжереях. При взятии материала из природных популяций массовый посев зрелыми семенами более надежен, но стерилизация и посадка таких семян существенно сложнее. Поэтому нами разработана эффективная методика, значительно упрощающая эти этапы введения в эмбриокультуру и массового получения клонов ценных форм орхидных в контролируемых условиях.

1. Huan T.P., Nguyen T.L., Oanh K.L. et al. Transcriptome characterization and population genetics of Ludisia discolor (Ker Gawl.) A.Rich (Orchidaceae): implication for its conservation in Vietnam // Biodiversity Data Journal. 2026. № 14. P. e173579. doi: 10.3897/BDJ.14.e173579

2. Bai Y., Ma Y., Chang Y. et al. Identification and transcriptome data analysis of ARF family genes in five provides new insight on conservation strategies // Conservation Letters. 2020. № 13 (2). doi: 10.1111/conl.12697

3. Ticktin T., Mondragón D., Lopez-Toledo L. et al. Synthesis of wild orchid trade and demography provides new insight on conservation strategies // Conservation Letters. 2020. № 13 (2). doi: 10.1111/conl.12697

4. Shirokov A.I., Syrova V.V., Salokhin A.V. et al. Conservation issues. № 5. Suppl. P. 145–154.

5. Averyanov L.V., Nguyen V.C., Vuong T.B. et al. New orchids in the flora of Vietnam X (Orchidaceae, Orchidoideae, tribe Orchideae, Epidendroideae, tribes Gastrodieae, Arethuseae, Cymbidieae, and Vandeae) // Phytotaxa. 2025. № 681 (1). P. 20–54. doi: 10.11646/phytotaxa.681.1.3

6. Ranjetta P., Rahmad Z., Vikneswaran M., Sreeramanan S. Autofluorescence study and selected cyanidin quantification in the Jewel orchids Anoectochilus sp. and Ludisia discolor // PLoS ONE. 2018. № 13. P. 1–19.

7. Nguyen C.K., Do T.H.T., Nguyen L.T.T. Cytotoxicity activity of Lusidia discolor extract against lung and liver cancer cells in An Giang // Vietnam Journal of Agricultural Science and Technology. 2021. № 5 (126). P. 96–101.

8. Jiang K., Møller B.L., Luo S. et al. Genomic, transcriptomic, and metabolomic analyses reveal convergent evolution of oxime biosynthesis in Darwin's orchid // Molecular Plant. 2024. № 18 (3). P. 392–415. doi: 10.1016/j.molp.2024.12.010

9. Li C., Dong N., Zhao Y. et al. A review for the breeding of orchids: Current achievements and prospects // Horticultural Plant Journal. 2021. № 7 (5). P. 380–392. doi: 10.1016/j.hpj.2021.02.006

10. Poobathy R., Zakaria R., Edhzam S.M. et al. Early Studies on Protoplast Isolation of Ludisia discolor, A Wild Orchid // Tropical Life Sciences Research. 2016. № 27. Suppl. 1. P. 17–19.

11. Большакова Е.В. и др. Культивирование орхидеи Anoectochilus roxburghii (Wall.) в условиях ex vitro // Известия вузов. Поволжский регион. Естественные науки. 2019. № 3 (27). С. 16–23. doi: 10.21685/2307-9150-2019-3-2

12. Малаева Е.В. Биотехнология как современный метод сохранения биоразнообразия // Грани познания. 2022. № 3 (80). С. 17–19.

13. Молканова О.И., и др. Применение биотехнологических методов для сохранения генофонда редких видов растений // Ботанический журнал. 2020. Т. 105. № 6. С. 610–619. doi: 10.31857/S0006813620030072

14. Андронова Е.В., Ивасенко Ж.В., Федорова Н.А. Жизнеспособность и темпы развития сеянцев Dactylorhiza maculata s.l. (Orchidaceae) в культуре in vitro // Ботанический журнал. 2007. Т. 92. № 7. С. 1035–1048.

15. Poobathy R., Zakaria R., Murugaiyah V., Subramaniam S. Surface sterilization and micropropagation of Ludisia discolor // Biocatalysis and Agricultural Biotechnology. 2019. № 22. P. 101380.

16. Kauth P.J., Johnson T.R., Stewart S.L. A classroom exercise in hand pollination and in vitro asymbiotic orchid seed germination // Plant Cell Tissue and Organ Culture. 2008. № 93 (2). P. 223–230.

17. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bio-assays with tobacco tissue cultures // Physiologia Plantarum. 1962. № 15 (3). P. 473–497.

18. Lai R., Lai S. Role of Tissue Culture in Rapid Clonal Propagation and Production of Pathogen-Free Plants // Crop Improvement Utilizing Biotechnology. 2019. P. 73–116.

19. Krumov N., Hristova V., Bonchev G. et al. Review on biological and biotechnological characteristics of the terrestrial orchid Ludisia discolor // Annual of Sofia University "St. Kliment Ohridski", Faculty of Biology, Book 2 – Botanics. 2022. № 106. P. 13–29. doi: 10.60066/gsu.biofac.bot.106.13-29

20. Ying L., Xiaohao L., Jingye Ch. et al. Effects of different factors on adventitious bud induction from stem explants of Ludisia discolor // E3S Web of Conferences. 2021. № 245 (03024). P. 1–4.