При анализе белковых препаратов для получения точных результатов анализа содержания аминокислот необходимо уделять внимание как выбору метода анализа аналитов, так и методу пробоподготовки образцов. В настоящее время известно несколько основных подходов для решения такой задачи: кислотный и щелочной гидролиз. В данной статье проведено сравнение методов анализа аминокислот с их пред- и постколоночной дериватизацией на примере определения содержания лизина в образцах сульфата лизина с известным содержанием целевого вещества. Для предколоночной дериватизации использовали ортофталевый ангидрид, и нингидрин для постколоночной дериватизации. Экспериментально нами было показано преимущество использования постколоночной дериватизации, т.к. были получены более точные результаты. Хроматографическое разделение, дериватизацию и детектирование выполняли на аминокислотных анализаторах фирм Hitachi (Япония) и Sykam (Германия). Далее были рассмотрены виды пробоподготовки белковых и пептидных препаратов с последующим определением в них валина и треонина методом постколоночной дериватизации. Изучено влияние метода доведения рН до 2.2 после кислотного гидролиза. Добавление щелочи к жидкому образцу показало лучшие результаты, чем метод упаривания и перерастворения образца в буфере с соответствующим рН. В итоге, для анализа исследуемых препаратов был выбран оптимальный подход для определения аминокислот в гидролизатах белков. Полученные данные сравнивали с данными, полученными в европейской аккредитованной лаборатории.

аминокислоты, высокоэффективная жидкостная хроматография, ионообменная хроматография, капиллярный электрофорез, аминокислотный анализ, кислотный гидролиз

1. Fallon A., Booth R.G.F., Bell L.D. Applications of HPLC in Biochemistry. Elsevier Science Publicher B.V. (Biomedical Division), 1987. 314 p.

2. Якубке Х.-Д., Ешкайт Х. Аминокислоты, пептиды, белки; под ред. Ю.В. Митина. М.: Мир, 1985. 455 c.

3. Joergensen L., Thestrup H.N. Determination of amino acids in biomass and protein samples by microwave hydrolysis and ion-exchange chromatography // Journal of Chromatography A. 1995. № 1-2. P. 421–428.

4. Csapo J., Kiss-Csapo Z., Albert C., Loki K. Hydrolysis of proteins performed at high temperatures and for short times with reduced racemization, in order to determine the enantiomers of D- and L-amino acids // Acta Univ. Sapientiae, Alimentaria. 2008. № 1. P. 31–48.

5. Boardman N.K. Ion-Exchange Chromatography // In: Biemann K. et al. Modern Methods of Plant Analysis. Moderne Methoden der Pflanzenanalyse. Berlin, Heidelberg: Springer, 1962. V. 5. P. 159–204.

6. Fountoulakis M., Lahm H.-W. Hydrolysis and amino acid composition analysis of proteins // Journal of Chromatography A. 1998. № 795 (2). P. 263–275.

7. ГОСТ 13496.21–2015 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения лизина и триптофана. М.: Стандартинформ, 2016.

8. ГОСТ 33428–2015. Корма, премиксы. Определение содержания лизина, метионина и треонина. М.: Стандартинформ, 2016.

9. Commission Regulation (EC) No. 152/2009 of 27 January 2009 laying down the methods of sampling and analysis for the official control of feed.